Cocobacilos Gramnegativos Aerobios y Anaerobios Facultativos

1.1. Características Generales

• Bacterias Gramnegativas con morfología cocobacilar pleomórfica.
• Anaerobias facultativas.
• Inmóviles.
• No esporuladas.
• Algunas especies poseen cápsula (factor de patogenicidad).
• Parásitos obligados del tracto respiratorio superior del hombre y animales, llegando a constituir hasta un 10% de la flora permanente de la orofaringe en individuos sanos. Raramente se ven involucrados en procesos infecciosos.
• Para su crecimiento necesitan los factores X y/o V de la coagulación.
• Fermentan carbohidratos con producción de ácidos.
• La mayor parte de Haemophilus son oxidasa y catalasa positivos.
• Las especies humanas de Haemophilus se asocian con las vías respiratorias altas, con excepción de Haemophilus ducreyi, que causa una enfermedad de transmisión sexual (ETS).

1.2. Especies Más Importantes

• Necesita los factores X y V: Haemophilus influenzae.
• Necesita el factor X: Haemophilus ducreyi.

Las siguientes pruebas diagnósticas sirven para la identificación de las especies que componen el género Haemophilus:

a) Dependencia de los factores X, V o ambos para crecer

Se detecta por la observación de crecimiento macroscópico en satélite alrededor de un disco que contiene cada uno de estos factores por separado o juntos, en un medio de agar carente de los mismos, como es el agar Mueller-Hinton.

b) Pruebas bioquímicas

• Fermentación de carbohidratos: glucosa, sacarosa, lactosa y manosa.
• Prueba de la catalasa.
• Indol.
• ONPG.
• Producción de galactosidasa.
• Producción de enzima ureasa.

c) Pruebas serológicas

Únicamente tienen valor para la identificación de las cepas capsuladas de Haemophilus influenzae. Se clasifican en 6 serotipos (a-f) según el antígeno capsular. La serotipia se puede realizar mediante pruebas de aglutinación en látex, por microscopía electrónica y por contrainmunoelectroforesis. El método más sencillo cuando el microorganismo está en cultivo puro es la aglutinación en porta, para lo que se realiza una suspensión en suero fisiológico de un cultivo joven de Haemophilus influenzae y se añade el antisuero. Una reacción positiva se pondrá de manifiesto por aglutinación de las bacterias y clarificación del líquido.

1.3. Haemophilus influenzae

Características

• Bacteria que parasita exclusivamente al hombre, localizándose en el tracto respiratorio superior.
• Para crecer requiere los factores X y V.
• Tiene cápsula:
  • Cepas no capsuladas: menos invasoras (epiglotis).
  • Cepas capsuladas: le permite resistir la fagocitosis y la lisis. El antígeno capsular permite distinguir distintos serotipos. El serotipo b es el más importante (meningitis).

Patología

Accede a las vías respiratorias superiores por inhalación, colonizando las mucosas. Hasta un 80% de las personas pueden ser portadoras de esta bacteria sin que desarrollen síntomas clínicos. Estas cepas pueden ser generalmente no capsuladas. Las cepas que se asocian a infecciones son cepas capsuladas y el serotipo más frecuente es el Haemophilus influenzae tipo b.

• Causa más frecuente de meningitis en niños menores de 5 años.
• Junto con el neumococo, es uno de los agentes etiológicos más frecuentes de otitis media bacteriana y sinusitis aguda.

Mecanismo de patogenicidad:
Microorganismo (vía aérea) -> epitelio -> reacción inflamatoria (bronquitis, neumonía, epiglotitis) -> torrente circulatorio -> meninges -> meningitis (cepas capsuladas serotipo b).

Diagnóstico

Muestra

• Hisopado y secreciones.
• Esputo.
• Líquido cefalorraquídeo (LCR).

Características utilizadas para identificar Haemophilus

Se utilizan 3 categorías para identificar las especies de importancia clínica, que son:

1. Reacción hemolítica en sangre de caballo: El agar chocolate tiene la desventaja de que no puede determinar las propiedades hemolíticas de Haemophilus haemolyticus y Haemophilus parahaemolyticus.
2. Necesidad del factor V.
3. Requerimiento del factor X para el desarrollo.
4. Prueba de satelitismo: Puede efectuarse una identificación presuntiva de los microorganismos en cultivos de material faríngeo y esputo haciendo una estría estafilocócica a través del área de la segunda estría. Una prueba positiva de satelitismo consiste en el crecimiento de pequeñas colonias de Haemophilus solo muy cerca de la estría de Staphylococcus aureus. Se debe hacer un frotis coloreado por Gram para confirmar la morfología.

1.4. Haemophilus ducreyi

Características

Requiere el factor X para su crecimiento.

Patología

Agente etiológico del chancroide o chancro blando, una enfermedad venérea caracterizada por la presencia de úlceras en los genitales y zona perianal. El periodo de incubación del chancroide tras el contacto con el microorganismo es de 7 días.

Al principio, aparecen pápulas rodeadas de una zona de eritema, que evolucionan a pústula y úlcera. Las úlceras tienen un diámetro de 1 a 20 mm con el borde poco definido. Se asemejan mucho a las originadas por la sífilis, herpes simple y linfogranuloma venéreo, por lo que debe establecerse un diagnóstico diferencial.

Mecanismo de patogenicidad:
Microorganismo (periodo de incubación de 7 días) -> pápulas con pus -> úlcera dolorosa con bordes indeterminados (zona alrededor inflamada: chancro blando) -> inflamación de ganglios inguinales.

Diagnóstico

Las muestras para el cultivo se deben tomar de la base de la úlcera.

Tinción de Gram: En el raspado procedente de la base de la úlcera o pus proveniente de ganglios se intentan observar pequeños grupos o cadenas paralelas de bacilos gramnegativos. La interpretación es difícil debido a la presencia de microorganismos contaminantes en las úlceras.

Género Brucella

2.1. Características Generales

• Cocobacilos Gramnegativos.
• Agrupados en parejas o cadenas cortas.
• Inmóviles.
• No esporulados.
• Aerobios estrictos.
• Pueden presentar cápsula.
• Catalasa y oxidasa positivos.
• Parásitos intracelulares.
• Tienen valor epidemiológico.

2.2. Especies

Especies más importantes, indicando la patología que producen:

• Brucella melitensis: Brucelosis típica del ganado ovino.
• Brucella abortus: Infección más leve, típica de vacas.
• Brucella suis: Típica de cerdos.

2.3. Patología

El periodo de incubación dura de 1 a 6 semanas. Se multiplican en el interior de las células del retículo endotelial, eludiendo la respuesta inmune del huésped. La iniciación es insidiosa con malestar, fiebre ondulante, debilidad, artralgia, mialgia y sudoración por la noche. La fiebre suele elevarse por la tarde; su disminución durante la noche se acompaña de sudoración profusa. Puede haber síntomas gastrointestinales y nerviosos. Aumenta de tamaño los ganglios linfáticos y el bazo se vuelve palpable. Estos síntomas de infección ceden por lo general en un plazo de semanas o meses, aunque pueden proseguir las infecciones localizadas y los síntomas.

Transmisión

La Brucella se transmite por:

Contagio directo

Contacto con animales infectados, inhalación de aerosoles, inoculación, contagio con mucosas en personas que trabajan con animales.

Contagio indirecto

Ingestión de leche y derivados no pasteurizados.

En el laboratorio puede transmitirse por contacto con la piel y mucosas, inhalación de aerosoles, inoculación accidental con agujas contaminadas. Por ello, las precauciones a tomar son:

• Trabajar en campana de seguridad.
• Usar bata, guantes y mascarilla.
• No oler placas de hemocultivo.
• No enfundar las jeringas de hemocultivo y tirarlas directamente al contenedor.

Diagnóstico

• Clínico: Circunstancias epidemiológicas, manifestaciones clínicas, lesiones anatomopatológicas macroscópicas.
• Laboratorial:
  • Diagnóstico bacteriológico (o de certeza).
  • Serológico (o presuntivo).

A. Diagnóstico Bacteriológico

Muestras

• Diagnóstico serológico: Suero.
• Diagnóstico clásico: Sangre (para hemocultivos seriados).

Examen directo

El examen microscópico de la muestra, previa tinción de Gram, tiene pocas posibilidades de éxito, dado el escaso número de microorganismos que puede contener. La técnica del anticuerpo fluorescente directo, que emplea anticuerpos anti-Brucella marcados con fluoresceína, proporciona mejores resultados que la tinción de Gram. Las tinciones ofrecen un diagnóstico de presunción, no definitivo, por lo que siempre hay que cultivar las muestras.

Medios de cultivo y condiciones particulares de cultivo

Al ser microorganismos intracelulares, necesitan requerimientos nutricionales complejos para crecer. Hay Brucella que se van a desarrollar bien en medios clásicos como agar sangre o agar chocolate.

Los más utilizados son:

• Medios líquidos: Caldo tripticasa soja; caldo Brucella.
• Medios sólidos: Modificado Thayer-Martin.
• Medios selectivos (contienen antibióticos): Modificado Thayer-Martin.

A todos los enfermos sospechosos de infección por Brucella se les debe realizar hemocultivos seriados; series de hemocultivos en distintos tiempos.

Técnicas de hemocultivo

• Técnica de Castañeda: Se utiliza un medio bifásico (líquido-sólido) en el mismo frasco. El medio líquido permite el enriquecimiento de las Brucella que se encuentran en la sangre y el medio sólido sirve para las resiembras. El frasco se debe incubar a 35-37ºC en posición vertical. A las 48 h, si no se observa crecimiento, el frasco se inclinará para que la fase líquida impregne el medio sólido y se incuba nuevamente en posición vertical. El hemocultivo se observa cada 4-5 días hasta un total de 30, haciendo periódicamente cultivos ciegos en medios sólidos.
• Isolator: Sistema de lisis-centrifugación en el mismo tubo. La sangre inoculada se lisa por acción de detergentes y se somete a concentración por centrifugación. El sedimento se siembra en medio sólido. Las muestras procedentes de abscesos o tejidos se siembran en cualquier medio sólido apto para el crecimiento de Brucella.

Factores de patogenicidad

• Fimbrias para adherirse a las mucosas.
• Cápsula.
• Capacidad de vivir dentro de las células.

B. Diagnóstico Serológico de la Brucelosis

El cultivo de Brucella siempre es diagnóstico de brucelosis; sin embargo, no siempre es posible el aislamiento de las Brucella a partir de muestras clínicas. Por ello, a menudo se recurre a métodos diagnósticos indirectos como las técnicas serológicas. La respuesta serológica de la Brucella es similar, por lo que las pruebas serológicas no van a permitir discriminar entre las especies.

• Rosa de Bengala.
• Prueba de aglutinación en tubos.
• Test de Coombs anti-Brucella.
• Prueba cutánea: Consiste en inyectar por vía intradérmica un extracto proteico de Brucella. A las 24 h, en algunos individuos infectados, aparece una zona de edema, eritema e induración.

3. Género Bordetella

3.1. Características Generales

• Pequeños bacilos Gramnegativos.
• Aerobios estrictos.
• Parásitos obligados de animales y del hombre.
• Se localizan en la membrana mucosa del tracto respiratorio, adhiriéndose a las células epiteliales ciliadas mediante fimbrias.
• Para su aislamiento se requiere el medio Bordet-Gengou, donde dan colonias transparentes, hemolíticas y muy pequeñas.

Especies que pueden ser patógenas para el hombre:

• Bordetella pertussis.
• Bordetella parapertussis.
• Bordetella bronchiseptica (nunca causa tos ferina).

3.2. Bordetella pertussis

Patología

Produce la tos ferina o coqueluche. Transmisión aérea de persona a persona.

Se distinguen 3 fases:

1. Etapa catarral: Tos como resfriado.
2. Etapa paroxística: Tos paroxística (tos seguida de una penosa y prolongada inspiración jadeante) con sensación de asfixia. Puede haber vómitos y cianosis. En niños menores de 3 años la crisis es en forma de apnea. La crisis va en aumento durante la primera semana, intensificándose en la segunda y tercera.
3. Etapa convaleciente: Empieza a disminuir la frecuencia y la intensidad.

Puede haber complicaciones en niños menores de 1 año: neumonías, convulsiones, encefalitis y también muerte.

Profilaxis

Durante el primer año de vida, se debe vacunar a los niños frente a Bordetella pertussis. Se suele administrar la vacuna combinada con la de la difteria y el tétanos (DTP).

Diagnóstico

A) Examen directo

Se puede hacer una tinción directa de anticuerpos fluorescentes a partir de un frotis procedente del hisopado nasofaríngeo. La sensibilidad de la técnica es muy variable, pero suele ser inferior a la del cultivo. Presenta la ventaja de que es una prueba rápida, aunque un resultado negativo no excluye la infección.

B) Aislamiento de muestras clínicas

Las muestras válidas para el cultivo de Bordetella son los exudados nasofaríngeos de la región posterior y los exudados bronquiales, tomados con torunda de alginato cálcico o con jeringa.

El medio clásico de aislamiento de Bordetella es el medio Bordet-Gengou, que contiene patata, glicerol y sangre de oveja. Las placas se incuban a 35ºC en atmósfera húmeda y con CO₂ opcional.

En medio Bordet-Gengou, las colonias a los 5-7 días de incubación son pequeñas, de color blanco perlado, con aspecto similar a gotas de mercurio. Las colonias producen hemólisis, que no siempre se aprecia.

C) Identificación

A partir de la colonia sospechosa se procede a la realización de una tinción de Gram. Las Bordetella son pequeños cocobacilos parecidos a Haemophilus influenzae, gramnegativos débiles, por lo que es conveniente prolongar la tinción con el colorante de contraste para que penetre bien la safranina. También se puede realizar la tinción directa de anticuerpos fluorescentes (DFA). Las Bordetella se verán como pequeños cocobacilos rodeados de un halo de fluorescencia y con la parte central oscura. Bordetella pertussis es oxidasa positiva, ureasa negativa, no reduce nitratos y aglutina con un antisuero específico.

D) Diagnóstico inmunológico

Los métodos inmunológicos no son tan útiles como el cultivo en la fase precoz de la enfermedad, pero pueden serlo en fases más avanzadas, cuando el número de microorganismos se ha reducido.

A partir de suero se puede determinar el aumento de los títulos de anticuerpos IgM, IgG e IgA en sueros pareados. También se pueden determinar las IgA en secreciones nasofaríngeas y saliva.

1. Familia Vibrionaceae

1. Introducción

Dentro de esta familia nos encontramos con los géneros: Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium y Lucibacterium. De todos ellos, el género más importante y el único que vamos a estudiar es el Vibrio. Existen en torno a unas 20 especies distintas, de las que la mitad son patógenas para el hombre, como por ejemplo el Vibrio cholerae, que es el agente causal del cólera.

2. Características

• Bacilos Gramnegativos, de naturaleza curva.
• Anaerobios facultativos.
• Móviles.
• Oxidasa + (diferenciación con las Enterobacterias) y catalasa +.
• Fermentan la glucosa y no la lactosa.
• Aguantan muy bien altas concentraciones de cloruro sódico.

Estructura antigénica

Tiene dos tipos de antígenos:

• Antígeno flagelar H: Termolábil, común a todos los vibriones.
• Antígeno somático O: Son específicos y se utilizan para la tipificación, dando lugar a seis grupos de vibriones: OI, OII, OIII, OIV, OV, OVI.

Al grupo OI pertenecen todos los patógenos, habiendo dos biotipos:

1. Sensibles a la polimixina B: Vibrio cholerae cholerae.
2. Resistente a la polimixina B: Vibrio cholerae el Tor.

Para diferenciar el Vibrio cholerae de los no patógenos, procedentes de agua, en el medio TCBS, se enfrentan al suero polivalente antisuero OI.

• Antígenos aglutinables por el suero O1: Vibrio cholerae, agente productor del cólera.
• Antígenos no aglutinables por el suero O1: Corresponde a los demás vibrios (V. NAG).

Toxinas

• Enterotoxina: Similar a la toxina termolábil de E. coli, que provoca un aumento de la secreción de agua y electrolitos a la luz intestinal.
• Hemolisinas termolábiles: Producidas por El Tor de V. cholerae, tienen actividad citotóxica, cardiotóxica y letal.

3. Patología

Los casos leves de cólera no se pueden distinguir clínicamente de los ataques leves de intoxicación alimentaria causada por Staphylococcus o miembros del grupo paratífico. El aislamiento depende únicamente del aislamiento e identificación del vibrión.

3.1. Vibrio cholerae

3.1.1. Patología

Agente etiológico del cólera, una enfermedad endémica en ciertos países del tercer mundo. La infección se adquiere por vía oral, necesitándose una dosis infectiva alta para que se produzca la infección, ya que muchos mueren con la acidez gástrica.

Deben de existir cinco condiciones esenciales para la aparición de un brote de cólera:

1. Predisposición individual junto con malos hábitos alimenticios.
2. Contacto humano.
3. Terreno habitable por seres humanos, poroso y mezclado con aire y agua.
4. Variaciones en la mezcla del suelo.
5. Suciedad en los suelos.

Los que sobreviven se anclan en las células epiteliales del intestino delgado y allí elaboran su enterotoxina. Todo ello produce una pérdida de líquido que, como consecuencia de una hemoconcentración, lentitud de la circulación, acidosis y, finalmente, el coma y la muerte.

Tratamiento

1. Rehidratación.
2. Corrección de la acidosis.
3. Mantenimiento.
4. Quimioterapia.

3.1.2. Aislamiento y diagnóstico del Vibrio

1. Toma de muestras

A partir de las heces diarreicas o incluso vómitos, procediendo de inmediato a su identificación debido a que el V. cholerae es muy sensible a los agentes externos. Si no puede realizarse la determinación en el momento, se utilizarían medios de transporte especiales como, por ejemplo, el medio de Cary-Blair o el agua de peptona.

2. Aislamiento

• Medios de enriquecimiento: Agua de peptona alcalina (pH en torno a 9), que inhibirá el crecimiento de muchas bacterias y, sin embargo, facilitará el aislamiento del V. cholerae.
• Medios específicos: Entre estos cabe destacar el medio TCBS (tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa).
• También se pueden utilizar los medios habituales de identificación de Enterobacterias, si es posible enriquecido con NaCl.

Medio TCBS

• Colonias amarillas (fermentan la sacarosa): V. cholerae.
• Colonias azules: V. parahaemolyticus y otros.

3. Pruebas bioquímicas

• Prueba de la oxidasa: Para diferenciarlas de las Enterobacterias.
• A partir de las colonias sospechosas se realizará una batería de pruebas bioquímicas que incluirán las mismas que para Enterobacterias.

4. Pruebas serológicas

Se utilizan sueros estándares específicos, el más utilizado el anti-O1, para diferenciar el V. cholerae del resto.

MEDIO TCBS -> colonias amarillas -> reacciones de aglutinación:

• Media colonia + suero anti-OI -> aglutinación -> V. cholerae.
• Media colonia: siembro en Kligler -> KA.

3.2. Vibrio parahaemolyticus

Produce gastroenteritis, generalmente causada por ingestión de pescado crudo. En España se ha aislado en los mejillones.

Características similares al V. cholerae, se diferencian en:

• Colonias azules con el medio TCBS.
• No aglutinan con el suero anti-OI.

Normas para evitar contraer cólera y diarrea del viajero

1. Hiérvalo.
2. Cocínelo.
3. Pélelo.
4. Evítelo.

En general, los viajeros no deben consumir:

• Agua sin hervir o procesar, ni hielo fabricado con esa agua.
• Alimentos y bebidas expendidos por vendedores ambulantes.
• Pescado o marisco crudo o poco cocidos.
• Vegetales crudos.

2. Campylobacter

1. Características

• Son bacilos Gramnegativos cortos, con forma de coma, espiral o alas de gaviota.
• Son microaerofílicos, es decir, crecen en atmósfera con baja concentración de oxígeno.
• Móviles por un único flagelo polar y no esporulados.
• No fermentan los carbohidratos.
• Dan positivas las pruebas de la oxidasa y de la catalasa.
• Habitan el tracto gastrointestinal de un gran número de animales. En el hombre se asocian a infecciones gastrointestinales, fundamentalmente, y cada vez en mayor grado a infecciones extraintestinales (meningitis, endocarditis, artritis séptica), especialmente en pacientes con SIDA.

2. Especies

• C. jejuni, C. coli y C. laridis son agentes etiológicos de diarrea.
• C. fetus subsp. fetus produce septicemia en pacientes inmunosuprimidos.
• C. cinaedi, C. hyointestinalis y C. fennelliae se han aislado de infecciones en homosexuales (enteritis y proctatitis).

3. Campylobacter jejuni

3.1. Patología

C. jejuni es la especie que con mayor frecuencia se ha asociado a infección en el hombre. Da lugar a gastroenteritis, con eliminación de sangre en heces.

La bacteria Campylobacter es una de las causas más comunes de enfermedades por consumo de alimentos en los Estados Unidos y en el mundo entero. Una persona infectada con estos organismos puede o bien no presentar síntomas o mostrarse muy enferma y sufrir diarrea, calambres estomacales, náusea, vómito, malestar y fiebre. Las personas que sufren de esta infección en ocasiones presentan heces sanguinolentas y una fiebre intermitente o hinchazón, enrojecimiento y dolor en las articulaciones.

Funcionarios del campo de la salud estiman que los organismos Campylobacter son la causa del 5% al 14% de todos los casos de diarrea a nivel mundial y que son los responsables de más de 2 millones de casos de enfermedad en los Estados Unidos anualmente.

Fuente de infección

:_Se adquiere por vía oral, ingestión de comida y bebidas contaminadas ( leche cruda o aves mal cocidas)._Por contacto con animales infectados.-.-.La bacteria enpra al cuerpo más comúnmente!pOr(lc ingewtan!de igua cïntaminada, leche cruda, carnes mal cocidas incluyendo la de pollo, o por el contacto con animales infectados como cachorros y gatos. La bacteria se encuentra en los pollos (por medio de un estudio se descubrió que el 98% de los pollos vendidos al por menor estaban contaminados con esta bacteria), de ahí que las personas que manipulan la carne de pollo cruda y la ingieren mal cocida están en alto riesgo.Transmisión:__C. jejuní es sensible al pH gástrico, por lo que debe ingerirse un inóculo elevado de microorganismo. C.jejuní se multiplica en el intestino delgado, invade el epitelio y produce inflamación. .-..-MO -> Intestino -> ENTERITIS: dolor abdominal cólico-> Vía oral -> Diarrea sanguinolenta-> escalofríos -> fiebre-.-.-.-Una vez que estos organismos llegan al estómago se multiplican, irritando su revestimiento, lo cual en la mayoría de los casos ocasiona síntomas de diarrea, dolor abdominal, calambres estomacales, una fiebre que fluctúa entre 37.8 º C y 40 º C (100° F y 104° F), náusea y vómito. Antes de que se presenten los síntomas, que usualmente duran de 2 a 10 días, hay un período de incubación de 3 a 5 días.-.-.-Las personas inmunodeprimidas, como aquellas que tienen VIH positivo o cáncer, poseen un mayor riesgo de complicaciones como las ocasionadas por la diseminación de la bacteria al torrente sanguíneo (sepsis), por lesión de las válvulas del corazón (endocarditis) y por meningitis.-.-.Duración entre 3 y 7 días, aunque puede estar excretando hasta un mes.-.-.La infección es autolimitada resolviéndose en una semana sin necesidad de administrar antibioterapia.-.-.En ocasiones puede pasar al torrente circulatorio y desarrollarse un cuadro de fiebre entérica.-.-.También puede producir otro tipo de infecciones como:_artritis sépticas_meningitis_proctocolitis.3.2 AISLAMIENTO.A-Medio de transporte:_CARY- BLAIR_CAMPY -THIO.B-Medios selectivos:_M. SKIRROW._M. BUTZLER._M. CAMPY BAR-.-.Todos estos medios llevan antibiótico para inhibir la flora acompañante. Generalmente se emplea un agar sangre con antibiótico.C-INCUBACIÓN:Tiene que realizarse de la siguiente forma:1-En microaerofilia: 5% de oxígeno, 10% de CO 85% de N. Se puede conseguir.__Campanas de anaerobios con sobres comerciales que generan la atmósfera deseada.__Bolsa de plástico donde se colocan las placas y se sellan y se llena con la mezcla de gases requerida.2-Incubación a 42ºC durante 72h (sobre todo para el jejuni y coli). Ambas especies pueden crecer a 37 ‘C; sin embargo, a 42 ‘C se inhibe la mayor parte de la flora fecal acompañante.-.-.Para otras especies de campylobacter distintas al C. Coli y C jejuni se debe hacer:-Empleo de medios selectivos sin cefalosporina-Incubar a 37º.-Microaerofilia-Durante 7 días.Métodos alternativos para aislar el Campylobacter en heces.__Filtrar las heces para eliminar los coliformes y otra flora contaminante.__El filtrado se diluye y se siembra en agar no selectivo, a 42 ‘C en atmósfera microaerofília.__Colocad el filtro en la superficie del agar y echar una gota de heces. __Tras incubación nocturna se retira el filtro y se reincuban las placas. Los campylobacter son capaces de atravesar el filtro y dar lugar a colonias en el agar.D-IDENTIFICACIÓN:_Colonias grises, incoloras, de aspecto mucoso y no hemolíticas.__A las colonias sospechosas se les hace una tinción gram: bacilos gramnegativos con forma de «S» o en alas de gaviotas o espirales a partir de heces diarreicas.__Pruebas de la oxidasa y de la catalasa positivas._Observar la movilidad-.-.-.El C. jejuni y C. co/í se pueden serotipar por técnicas de hemaglutinación indirecta y de aglutinación en portaobjetos.IDENTIFICACIÓN RÁPIDA.Crecimientos en medios selectivos.Tinción de Gram en S o forma de alas de gaviota.Oxidasa positivo .Catalasa positivo.4- CAMPYLOBACTER COLI:Causa infección gastrointestinal similar a C. jejuni.Se diferencia del C. jejuni en la prueba del hiprato:__C. jejuni……….hidroliza hipurato.__C. coli ………..no hidroliza el hipurato.3. HELYCOBACTER PYLORI:Produce lesiones gástricas y úlceras pépticas.-.-En 1982, se aislaron por primera vez del estómago de pacientes con lesiones gástricas y úlcera péptica, unos bacilos gramnegativos con forma de espiral y con gran actividad ureasa, a los que se les denominó Campylobacter pylorídis, nombre que posteriormente se rectificó a Heliobacter pylori.._H. pylori se encuentra solamente en las células epiteliales gástricas secretoras de moco. Parece ser que es el agente causal de la gastritis crónica y también puede ser un factor importante en la patogenia de la úlcera péptica.CARACTERÍSTICAS:__Son microaerófilo y la temperatura óptima de aislamiento es 42ºC la mayoría de las cepas tardan de 3 y 5 días.__Pueden sembrarse en medios selectivos con sangre, dando colonias pequeñas grises y translúcidas._Bacilos pequeños curvos, ligeramente rechonchos._Catalasa, oxidasa y ureasa positiva._El diagnóstico requiere una endoscopia.DIAGNÓSTICO:Se suele hacer en heces-El diagnostico en algunos laboratorios no se realiza en el laboratorio de microbiologia , se realiza por absorción atómico del C13-.-.Se le añade un recativo con C13 y como en su metabolismo produce CO2-este puede ser detectado por absorción atómica