Microbiología: Estructura Celular, Tinción de Gram y Técnicas de Cultivo

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Estructura de la Pared Celular

  • Gram positivos: 40 a 50 láminas, ácido teicoicos y lipoteicoico, forma L: protoplastos, membrana citoplasmática.
  • Gram negativos: lipopolisacáridos, lípido A, forma L: esferoplastos.

Fundamento de la Tinción de Gram

  1. Colorantes de baciloscopia
  2. Tinción de Gram:
  • Permite diferenciar entre gram positivo y gram negativo ya que la membrana permeable de las gram negativas se decolora de cristal violeta y se vuelve a teñir de nuevo con la safranina.
↓ Yodo cristal violeta y safranina Alcohol/acetona Por la capa gruesa de péptido glucano el cristal violeta Membrana interna y externa

Espacio periplasmático: lípido A, capa de peptiglucano, factor de virulencia.

Ejemplos de Gram Positivo y Negativo

  • Gram +: Staphylococcus y Streptococcus
  • Gram -: Nisseria, Entoacterias

Antisépticos y Desinfectantes

  • Antisépticos (tejido vivo): Isodine, agua oxigenada y alcohol
  • Desinfectantes (sustancias utilizadas en objetos inanimados): cloro, formaldehido y alcohol

Bactericida, Bacteriostático y Fungicida

  1. Bactericida: Sustancia que mata bacterias.
  2. Bacteriostático: Impide la reproducción de bacterias, pero no las mata.
  3. Fungicida: Sustancia tóxica que elimina hongos y mohos.

Cultivo Puro

Presencia de una sola colonia bacteriana.

Técnicas de Cultivo

  • Descarga, dispersión y estría cerrada, con la finalidad de aislar colonias.

Exudado Faríngeo

Útil para diagnosticar infecciones como amigdalitis por estafilococos o estreptococos y establecer el foco infeccioso en enfermedades como la escarlatina, fiebre reumática, glomerulonefritis hemorrágica aguda.

  1. Agar sangre: hemolisis alfa, beta y gamma.
  • β-hemolíticas: Streptococcus pyogenes (tipo A), Staphylococcus aureus, Corynebacterium, Haemofilus
  • α-hemolíticas: Streptococcus pneumoniae
  • γ-hemolíticas: Streptococcus viridans y Neisseria sp, Micoplasma y Legionella
Agar S110: aureus (dorado) Agar chocolate: Nisseria meningitidis, Hemophilus influenzae

Antibiograma

  1. ¿Cómo se identifica? Si la bacteria es sensible al fármaco se observará la formación de un halo transparente; si no se forma, la bacteria es resistente.
  2. Indicaciones: Sirve para determinar la sensibilidad de las bacterias a los fármacos y así prescribir el tratamiento correcto.
  3. Síntesis de proteínas, peptidoglicano
  4. Replicación
  5. Mecanismos

Urocultivo

  1. ¿Para qué se indica? Para identificar infecciones del tracto urinario en caso de hematuria, disuria, poliuria, dolor en fosa renal.
  2. Técnica:
  • Tomar una muestra de orina previamente mezclada
  • Inocular en el agar sangre y estirar por la superficie del medio
  • Repetir el paso anterior en el agar EMB y BHI
  • Incubar a 37°C por 24 horas
  • Contar el número de colonias desarrolladas en el agar BHI, multiplicando por 100 para obtener el recuento de bacterias
  • Tratar de identificar las colonias desarrolladas en el agar sangre y EMB
Cuenta de Kass:
  • -10000 bacterias/ml indican contaminación
  • +10000 bacterias/ml según el microorganismo aislado puede indicar o no infección
  • +100000 bacterias/ml indica proceso infeccioso

Sangre BHI-EMB

  • Medio selectivo, diferenciador
  • S110, S.S, EMB, Mac Conkey
  • BHI: estría cerrada
  • EMB y sangre: estría abierta

Coprocultivo

Indicación: Para demostrar infecciones gastrointestinales.

Agar S.S, EMB, Mac Conkey: transparentes incoloras

Patógenos: verde amarillo viscoso. E. Coli

M.C.: bacterias gram – cepas que fermentan

Lactosa positiva: E. coli, Enterobacter, Klebsiella

Lactosa negativa: Samonella, Shigella, Proteus

Bacterias patógenas negativas

Antipatógeno negativo

Hemocultivo

  1. ¿Cuándo debe solicitarse? En la fase exponencial, cuando el pico febril es más alto (etapa aguda).
  2. Sirve para diagnosticar enfermedades como:
  • Meningitis
  • Neumonía
  • Endocarditis bacteriana
  • Fiebre tifoidea

Pruebas Bioquímicas

1.Para que sirven: para saber los distintos tipos de enterobacterias, saber el metabolismo, movilidad, diferenciar si producen ácido sulfúrico

2.TSI: Este medio se utiliza para determinar la capacidad de los bacilos gramnegativos para fermentar lactosa, sacarosa y glucosa, así como para determinar su capacidad de producir H2S (ácido sulfúrico) y gas. Presenta un resultado de pico alcalino y fondo alcalino (pico rojo/ fondo amarillo) fermenta glucosa.

3.Caldo urea: Detecta la presencia de la enzima ureasa, si hay presencia de burbujas o ruptura del medio de cultivo indica que el microorganismo produce gas (ureasa)

4.Simmons: Determina la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato como única fuente de carbono. Presenta un resultado de pico ácido y fondo acido (pico amarillo/ fondo amarillo) fermenta glucosa, lactosa y sacarosa.

5.SIM:Es un medio que se utiliza para determinar la presencia de flagelos, (movilidad), así como las enzimas descarboxilasa de ornitina y triptofanasa. Presenta un resultado de pico alcalino y fondo alcalino (pico rojo/ fondo rojo) que no fermenta azucares.

6.Reactivo de kovac saber si es positivo para la producción de indol.