PARASITOLOGIA INTESTINAL:
El análisis parasitológico de heces se llama también examen coproparasitológico. Las técnicas empleadas se orientan a la búsqueda e identificación morfológica de quistes y formas vegetativas de protozoos, y de huevos, elementos maduros y fragmentos de helmintos
A)Examen macroscópico:
Consistencia de las heces, color, presencia o no de mucosidades y/o sangre. Observación de helmintos adultos o fragmentos de los mismos.
B) Examen microscópico
·En fresco:-Examen directo en fresco.-Técnicas de concentración (sedimentación).
·Examen tras tinción-Hematoxilina férrica.-Coloración Tricrómica.-MIF.
EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
Es el proceso más simple y permite observar formas vegetativas de protozoos en caso de elevado grado de parasitación. Es necesario que las heces sean lo más recientes posible y conservadas a 37ºC aprox. (Cuando se enfrían las formas vegetativas se enquistan). Pueden observarse colocando sobre un porta limpio una gota de suero fisiológico a 37ºC. Con un palillo se toma una pequeña cantidad de heces y se homogeneizan con el suero para obtener una suspensión transparente. Se puede añadir una gota de solución de lugol que tiñe los parásitos de color amarillento. Se coloca el cubre sobre el porta y se observa al microscopio a 10x para localizar y a 40X para identificar.
TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN
La preparación en fresco con frecuencia no permite observar la presencia de parásitos en las heces, por ello es necesario utilizar métodos de concentración para observar huevos y quistes que en un examen en fresco podrían pasar desapercibidos. Los métodos que se utilizan para concentrar huevos y quistes son con frecuencia difásicos (emplean dos diluyentes, uno hidrosoluble y otro liposoluble). La misión del disolvente hidrófilo será retener los parásitos, huevos o/y quistes. La fase lipófila elimina de la muestra sustancias liposolubles muy abundantes y que causarían un gran número de interferencias en la observación de los parásitos. (Estas quedan retenidas en el sobrenadante). Existen varios métodos de concentración. Nosotros realizaremos el de Bailenger modificado.
METODO DE BAILENGER MODIFICADO:
Material-Mortero y pistilo-Espátula o depresor lingual-Probeta de 20ml-Tubo de centrífuga de base cónica y graduado-Tapón de goma o caucho-Pipeta pasteur y chupete-Porta y cubreobjetos-Centífuga-Microscopio
Reactivos-Solución tampón acético-acetato o S.F.+ gotas de acético-Eter etílico-Lugol.
Técnica:Se diluyen las heces en solución tampón o S.F. aprox. 10 veces su volumen. Se trituran en mortero (aproximadamente un volumen de heces del tamaño de una avellana en 20ml. del ácido o S.F. Se transfiere la mezcla a una probeta de 20ml. Se deja sedimentar al menos 1 minuto. Se pasan al tubo de centrífuga 5ml de la mezcla. Se añaden 5ml de eter etílico. Se tapa el tubo y se agita vigorosamente (el éter extraerá las sustancias liposolubles). Se centrifuga 5minutos a 1.500-2000 r.p.m. Se decanta el sobrenadante y se coloca una gota del sedimento entre porta y cubre. (se puede añadir una gota de lugol). Se observa al m. o. a 10x para localizar y a 40x para identificar quiste o huevos de parásitos.
CONSERVACIÓN DE LAS PREPARACIONES FRESCAS DE HECES:
Sellado con vaselina:Colocar una porción de vaselina comercial entre el porta y el borde del cubre. La preparación se conserva durante algunas horas. Sirve para observar parásitos vivos que no soportan calor ni solventes.Sellado con laca de uñas:Recubrir la suspensión de heces con el cubreobjetos. Dejar unos instantes para que la humedad se evapore y sellar los bordes con laca de uñas. Dejar secar. Presionar suavemente sobre el centro del cubre, aplicar una segunda capa y dejar secar de nuevo. La conservación es buena si está bien cerrado
3.-Procesamiento de la muestra:
debe realizarse 1examen macroscópico inicial de la muestra y a continuación un examen microscópico.
HECES:
A)Examen macroscópico:__Color de las heces:–heces negras:conteniendo sangre o productos medicamentosos.–heces masilla acólicas.–heces verdes:xla biliverdina,vegetales o medicamentos.–ocres:q toman color marrón rápidamente en contacto kn el aire x oxidación y q kntiene estercobilinógeno.–poco coloreadas:x presencia de leucostercobilina,debido a las putrefacciones imp.__Consistencia en las heces:–heces en bolitas a veces fragmentadas,heces caprinas.–moldeadas duras,sólidas,pastosas.–en boñliga.–semilíquidas y heterogéneas resultado de una estancia prolongada en el colon kn hipersecreción de mucus.–líquidas.–grumosas indica a veces presencia de fécula no digerida.–esponjosas ocres,revela presencia de estercobilinógeno kn1 alta tasa de ácidos orgánicos,almidón.–en pasta de modelar abundancia de lípidos,esteatorrea.
B)Examen microscópico:
pde realizarse kn las eces tal kmo son emitidas en fresco o bien tras tincion o enriquecimiento de la muestra.
SANGRE:
los principales parásitos a investigar en estas muestras son plasmodium,filarias y tripanosoma.
A)Examen en fresco:
depositar1gota de sangre en porta con1gota solución salina y cubrir con cubre.metodo no siempre eficaz,pero sirve para diagnostico en casos de infección masiva,specialmnte x microfilias y tripanosomas.
B)Examen tras tinción:
con 1 gota gruesa o extensión sanguínea.
ORINAS Y EXUDADOS VAGINALES:
kn estas muestras pdemos investigar Trichomonas vaginalis.
A)Examen en fresco:
muy demostrativo si las Trichomonas conservan su movilidad.
B)Examen tras tinción:
pde teñirse utilizando la coloración x el método giemsa.
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO(LCR):
de gran importancia para investigar en el periodo secundario de las infecciones x trypanosoma gambiense,o bn los casos de inf x Amebas de vida libre.
A)Examen en fresco:
en casos de trypanosomiasis,se realiza a partir de sedimento obtenido dsps de centrifugación lenta.
B)Examen tras tinción:
tinción de giemsa.
LIQUIDO DE PUNCION-M.O.:
útiles en diagnóstico de abscesos hepáticos amebianos,diagnóstico de leishmania donovani a partir de punción esternal,hepática,esplénica o ganglionar y en los caos de inf de Toxoplasma gondii,punción ganglionar.
A)Examen en fresco:
util en casos de absceso amebiano.
B)Examen tras tinción:
en caso de inf x leishmania se utiliza tinción de giemsa.en inf x entamoeba histolytica,tinción x métodos tricrómicos.
PIEL Y FANERAS:
se utiliza sobretodo en protozoología en los casos de botón de orient investigar leishmania tropica.–se extrae la serosidad,previamnte se realiza la desinfección de la úlcera.kn las cel arrancadas se hace1 extensión en1 gota de solución salina.
EXPECTORALES:
se emplean para el diagnóstico de las inf producida x pneumocystis carinii y stronglyaides stercoralis.el xenodiagnóstico consiste en utilizar artropodos alimntandolos kn sangre a estudiar.tecnicas realizadas en lab especiales para diagnóstico trypanosoma cruzi.